甘草为豆科甘草属乌拉尔甘草、照应总黄胀果甘草或者光果甘草的面优干燥根以及根茎，多妨碍在干旱、化超化钻半干旱的声提草原、沙漠或者丘陵地带，取甘是草渣一味罕用大批药材，被称为“国老”，酮工在中医里有“十方九草”之说，艺及研不光自己具备补脾益气、抗氧清热解毒、照应总黄祛痰止咳、面优缓急止痛、化超化钻抗氧化、声提保肝以及增强影像力的取甘成果，还在中药配伍中具备调以及诸药，草渣以削减药效的熏染。

当初，从甘草中分说出的化合物有400多种，其中黄酮类化合物含量至多，且生物活性较强，其因连有异戊烯基，使患上其脂溶性削减，具备抗炎、抗氧化抗病毒川、抗肿瘤、抗烦闷、冷清以及镇痛等功能，并对于人类免疫缺陷病毒有较强的抑制增殖熏染，其潜在的药用价钱重大。当初的提取措施主要有：有机溶剂提取、碱性稀醇或者碱性水提取、超声提取、微波提取、超临界萃取、酶解提取等措施。其中超声提取法是不光高效、省时、低老本，而且超声波具备空化熏染、热效应以及机械搅拌等熏染，在提取做作物资时，对于实用成份的破损性小。

甘草渣是提取甘草酸后残余的药渣，有钻研表明其中含有大批的黄酮类物资，为了更高效的运用药材，本试验以甘草渣为钻研工具，对于超声辅助提取其总黄酮的工艺妨碍了钻研，患上到最优提取条件，并对于其抗氧化能耐妨碍了审核，以期对于尔后甘草的运用以及开拓提供参考。

一、试验仪器与质料

一、试验质料与试剂

无水乙醇、氢氧化钾：天津市永大化学试剂有限公司；硫酸亚铁：天津市博迪化工股份有限公司；水杨酸：天津市百世化工有限公司；双氧水：天津欧博凯化工股份公司；1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）：日本光以及纯药；维生素C：北京索莱宝科技有限公司；铁氰化钾：天津市科密西化学试剂有限公司；三氯乙酸：天津市永大化学试剂有限公司；以上试剂均为合成纯。甘草苷：潍坊华植生物科技有限公司；甘草购于石家庄某公司。

二、仪器

KQ5200DE型超声波洗涤器：昆山市超声仪器有限公司；SZF-06A型快捷提取仪：上海新嘉电子有限公司；R201C型真空旋转蒸发仪：上海亚荣生化仪器厂；TGL-10B型高速台式离神思：上海安亭迷信仪器厂；UV-6000PC型紫外可见分光光度计：上海元析仪器有限公司；DZF-6050型真空干燥箱：上海博讯实业有限公司；B-260型恒温水浴锅：上海亚荣生化仪器厂。

三、措施

（1）甘草苷比力品的配置装备部署

精确称取甘草苷15mg置于25mL容量瓶中，退出70%乙醇溶液至刻度，制成浓度为0.6mg/mL的甘草苷比力品溶液，置于4℃条件下，备用。

（2）甘草渣中总黄酮的提取

取过多甘草，破碎捣毁，过60目筛后精确称取100.0g于烧杯中，退出含0.3%氨水的60%的乙醇水溶液500mL，80℃回流提取2次，每一次2h，过滤后滤渣即为甘草渣，干燥后备用。

精确称取备用甘草渣2.0g于容器中，退出70%乙醇溶液，超声处置后，在确定温度下妨碍回流提取。过滤后5000r/min离心10min，取上清液妨碍稀释、再用70%乙醇溶液妨碍消融定容至25mL即为样品溶液，置于4℃条件下，备用。

（3）总黄酮的测定

精确移取差距梯度浓度的比力品溶液于25mL的容量瓶中，加0.5mL的氢氧化钾溶液（10%），震撼使混合平均，室温下部署10min，70%乙醇溶液定容。以70%乙醇溶液作为空缺比力，在400nm处测定其罗致值。以比力品溶液的浓度为横坐标，对于应的吸光度值为纵坐标，妨碍线性回归，患上回归方程为Y=0.01799X+0.05153，R²=0.9991，服从表明在浓度为6ug/mL～60μg/mL的规模内，其浓度与吸光度呈精采的线性关连，见图1。

移取0.8mL样品溶液于25mL的容量瓶中，一再上述操作，测患上其罗致值，带入回归方程中，患上出其总黄酮的含量，凭证公式（1）合计收率。

（4）单因素试验

①料液比对于甘草渣总黄酮收率的影响

精确称取2.0g甘草渣，分说以料液比1:25（g:mL）、1:30（g:mL）、1:35（g:mL）、1:40（g:mL）以及1:45（g:mL）的比例退出70%乙醇溶液，超声30min，在60℃下回流提取2h。

②超声光阴对于甘草渣总黄酮收率的影响

精确称取2.0g甘草渣，以料液比1:35（g:mL）的比例退出70%乙醇溶液，分说超声10min、20min、30min、40min、50min以及60min，在60℃下回流提取2h。

③提取光阴对于甘草渣总黄酮收率的影响

精确称取2.0g甘草渣，以料液比1:35（g:mL）的比例退出70%乙醇溶液，超声40min，在60℃下分说提取lh、2h、3h以及4h。

④提取温度对于甘草渣总黄酮收率的影响

精确称取2.0g甘草渣，以料液比1:35（g:mL）的比例退出70%乙醇溶液，超声40min，分说在50℃、60℃、70℃、80℃以及90℃下提取2h。

（5）照应面优化试验

在单因素试验的根基上，抉择超声光阴、提取光阴以及提取温度为自变量，以提取率为照应值，妨碍Box-Behnken照应面试验妄想，每一个因素取3个水平，一着实施一再3次。详细因素试验水平见表1。

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